目前普遍使用液氮作为精液冷冻保存的冷源。液氮是氮气在降温压缩条件下形成的一种无色、无味、无毒的液体、沸点为-195.8℃;液氮性不活泼,渗透性很弱;无彻底杀伤生物细胞的能力,故精子、细菌、微生物等均能在其中生存;液氮还具有温度低、体积小、便于运输的特点。
冷冻精液目前通用的剂型有塑料细管和颗粒两种剂型。
塑料细管型
优点是可大批生产、产品质量均匀、可避免液氮对精液的污染。每个细管上都应印有种畜的品种、名号、批号及出厂日期。现比较流行的有0.25毫升和0.5毫升两种型号。
颗粒型
所需设备简单、体积小、便于贮存。但缺点是容易污染、产品不规格、不易标记。
精液冷冻工艺流程为:采精—精液品质检查—稀释分装—平衡—检查冻前活力—液氮冻结—抽样解冻并检查活力—置液氮内保存。
精液的解冻:细管型冻精解冻时可直接置于35~40℃温水中,待冻精溶化一半时取出备用。颗粒型冻精解冻有干解冻和湿解冻两种:干解冻是先将灭菌细管置于35~40℃水中恒温后,投入冻精颗粒,摇动至完全溶化,同时加入1毫升20~30℃的解冻液;湿解冻是先将盛有1毫升解冻液的安瓿置于35~40℃的水中恒温,再投入颗粒冻精,摇动至溶化取出备用。
利用SX-MOFLO精子分离设备分离奶牛XY精子,将分离后的奶牛X精子冷冻保存。探讨奶牛X性控冻精解冻后存活时间、不同方法进行人工授精的受胎率,为奶牛X性控冻精的大规模推广应用提供依据。方法与结果:(1)取不同种公牛、不同批次的X性控冻精及普通冻精解冻后倒入5 mL试管内摇匀,至37°C水浴锅中,每2 h检测一次精子活力,4 h后每小时检测一次精子活力,直至无运动精子。结果奶牛X性控冻精存活时间为5~12 h,比同种普通精子的存活时间短2~10 h。(2)应用奶牛X性控冻精人工授精的母牛的情期受胎率(59.4%=342/576)与普通冻精的情期受胎率(60.6%=129/213)相比,无显著差1、冷冻保存是将东西冷冻保存,精液保存主要是将精液冷冻保存,是将人的精子用速冻法或缓冻法冷冻1年时间。
2、冷冻保存应用于很多的领域如中国古代的地窖和现代的冰箱。它们的主要功能都是冷冻保存。
3、将体外培养物悬浮在加有冷冻保护剂的溶液中,以一定的冷冻速率降至零下某一温度,并在此温度下对其长期保存的过程。
4、按照冷冻保护液在冻结后是否形成冰晶来划分,冻存方法可分为非玻璃化和玻璃化冻存两种。
5、非玻璃化:非玻璃化冻存是利用各种温级的冰箱分阶段降温至-70℃~-80℃,然后直接投入液氮进行保存;或者是利用电子计算机程控降温仪以及利用液氮的气、液,按一定的降温速率从室温降至-100℃以下,再直接投入液氮的方法,以该种方法冻结的细胞悬液或多或少都有冰晶的形成。
6、玻璃化:玻璃化冻存则是指利用多种高浓度的冷冻保护剂联合形成的玻璃化冷冻保护液保护悬浮细胞,直接投入液氮进行冻存的方法,以该种方法冻结的细胞悬液没有冰晶的形成,细胞冻存是最常用的仍是前一种方法。
7、精液保存是体外受精、人工受精培育动物的一个关键问题。目的在于延长精子在体外的存活时间,通过运输扩大使用范围。精液保存分为常温保存(15-25℃)、低温保存(0-5℃)、冷冻保存(-79℃、-196℃)3种。
8、卵母细胞的冷冻保存比精子和胚胎困难。冷冻后卵母细胞的线粒体、微管、囊泡等亚细胞结构会受到损伤,冷冻保护剂也会促使透明带过早硬化。如果冷冻造成了卵母细胞亚细胞结构的损伤,会影响到卵母细胞复苏后的质量。
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