Km是由酶和底物的相互关系所决定的，它可以用来判断酶的最适底物。Km值等于酶促反应速度达到最大反应速度一半时所对应的底物浓度，是酶的特征常数之一。不同的酶Km值不同，同一种酶与不同底物反应Km值也不同，Km值可近似的反应酶与底物的亲和力。
测定Km和Vm，一般通过作图法求得。作图方法很多，其共同特点是先将米氏方程式变换成直线方程，然后通过作图法求得。最常用的方法为双倒数作图。将1/V对1/［S］作图，即可得到一条直线，该直线在Y轴的截距即为1/Vmax，在X轴上的截距即为1/Km的绝对值。
Km的求法
Km即是当反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。从v—[s]矩形双曲线上可得V，再从V/2处可求得Km值，但实际上，即使用很大的底物浓度，也只能得到趋近于V的反应速度，而达不到真正的V，因此测不到准确的Km值，为了得到准确的Km值，可以把米氏方程式加以改变，使之成为斜截式：y=kx+b的直线方程，然后用图解法求出Km值。
测定方法如下：1. 首先新建一个数据表，将底物浓度与反应速率的数据输入，设定底物浓度为横坐标X，反应速率的纵坐标Y。
2. 全选X 与Y坐标数据，然后选择菜单栏Analysis: Fitting: Nonlinear Curve Fit：Open Dialog。
3. 在Setting：Function Selection页面内的Category选择Pharmacology, Function选择米氏方程（MichaelisMenten）, 而后点击Fit便可得到拟合结果了。注意：Origin 8.0以前的版本中没有保存米氏函数，大家可以选择Hill函数。
4. 非线性拟合结束后即可查看拟合结果报告。另外我们也可以在拟合报告中查看拟合获得的图形。
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