影响凝集反应实验结果的因素

影响凝集反应实验结果的因素,第1张

1 温度。温度影响酶的活性

2 时间。随着时间的延长细胞聚集程度加大

3 反应底物

4 细胞类型

5 反应培养板的质量

6 人为因素

影响细胞融合的因素:

1、分子量与浓度:细胞融合效果与分子量及其浓度成正比;但分子量越大、浓度越高, 对细胞的毒性也就越大。为了兼顾二者,在实验时常常采用的分子量一般为1000~4000,浓度一般为40~60%。

2、pH值:经验证,pH值在8.0~8.2之间融合效果最好。

3、处理时间:处理时间越长,融合效果越好, 但对细胞的毒害也就越大。故一般将处理时间限制在1分钟之内。本实验中细胞融合后无需继续培养,故处理时间可适当放宽至数分钟。

基本过程包括细胞融合形成异核体、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细胞。细胞融合可作为一种实验方法被广泛适用于单克隆抗体的制备,膜蛋白的研究。

扩展资料:

融合过程不存在有性杂交过程中的种性隔离机制的限制,为远缘物种间的遗传物质交换提供了有效途径。体细胞杂交产生的杂种细胞含有来自双亲的核外遗传系统,在杂种的分裂和增殖过程中双亲的叶绿体、线粒体DNA亦可发生重组,从而产生新的核外遗传系统。

细胞膜有内外两层,细胞融合首先发生在外层,然后再到内层,由此就出现了两种融合通道,细胞体内物质通过这两种通道转移。

病毒膜与目标细胞融合时,只出现一种融合通道,即导致融合的基因只能在病毒中找到,而在目标细胞中却找不到。但是,通过EFF-1发生的细胞融合则是一个双向融合过程,需要EFF-1出现在两个相互融合的细胞中。

细胞膜在光学显微镜下不易分辨。用电子显微镜观察,可以知道细胞膜主要由蛋白质分子和脂类分子构成。在细胞膜的中间,是磷脂双分子层,这是细胞膜的基本骨架。

在磷脂双分子层的外侧和内侧,有许多球形的蛋白质分子,它们以不同深度镶嵌在磷脂分子层中,或者覆盖在磷脂分子层的表面。这些磷脂分子和蛋白质分子大都是可以流动的,可以说,细胞膜具有一定的流动性。细胞膜的这种结构特点,对于它完成各种生理功能是非常重要的。

细胞质不是凝固静止的,而是缓缓地运动着的。在只具有一个中央液泡的细胞内,细胞质往往围绕液泡循环流动,这样便促进了细胞内物质的转运,也加强了细胞器之间的相互联系。细胞质运动是一种消耗能量的生命现象。细胞的生命活动越旺盛,细胞质流动越快,反之,则越慢。细胞死亡后,其细胞质的流动也就停止了。

参考资料来源:百度百科——细胞融合

细胞融合的影响因素

一、影响动物细胞融合的因素

在动物细胞的融合过程中,细胞融合率不仅会受到促融剂的影响,而且离子强度、离子种类、温度、PH、细胞性质等均会对细胞融合率产生影响。

1、细胞融合时,温度和运动状态需要适宜。

2、细胞融合过程中,一般会消耗大量的氧气,缺氧时不融合。

3、某些细胞融合时需要Ca2+,不然不融合。

4、PH为7.4-7.8为Z合适的酸碱度,不在该范围内,不适合融合。

5、亲本细胞表面性质对细胞融合率有比较大的影响,如果表面光滑,那么融合比较难,如果表面覆盖绒毛而不规则,那么融合比较容易。

6、不同的细胞种类,融合效果也会有所差异。例如淋巴细胞、血细胞几乎不融合,腹水癌融合比较容易。

二、影响植物细胞融合的因素

植物原生质体融合不存在种属特异性,和其自身种属不相关联,因此,只有外界条件影响融合效率。

1、将少量CaCI2加入到融合液中,会对电导率起到一定的维持作用,从而保护细胞。除此之外融合率会受到电脉冲大小、处理时间长短、以及交变电流的强弱的影响。

2、在融合前,将原生质用混合盐溶液进行处理,和将伴刀豆蛋白、二甲基亚砜等添加进促融剂中,能够使得融合率提高。

3、当电场诱导融合时,原生质体密度会对融合率产生影响。2-8×104个/ml为Z适宜的密度,如果密度大于106个/ml,那么会融合成团;如果密度小于104个/ml,那么会得到较低的融合效率。

4、作用时间在PEG诱导融合中起到关键性作用,特别重要的是高Ca2+和PH溶液处理时间长短。如果时间过短,那么不融合;如果时间过长,那么会严重损伤原生质体,大大降低融合效率。

5、融合效率也会受到PEG规格和纯度的影响。


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