wb得出灰度值比后如何作图

1、打开Image J软件。

2、导入WB条带图片：File→Open→找到WB条带。

3、把图片转化成灰度图片：Image→Type→8-bit。

4、消除图片背景的影响：Process→Subtract Background，在d出的对话框中，填上50基本就可以了，并勾上Lightbackground，点击OK。此时图片背景会变白一些。

5、设置定量参数：Analyze→Set Measurements。在d出的对话框中勾选Area、Mean grayvalue、Min&max gray value、Integrated density。

6、设置单位：Analyze→Set Scale。在d出的对话框“Unit of length”后面填上“pixels”，其他的不用改动。

7、把WB图片转换成亮带：Edit → Invert。

8、选择菜单栏下的不规则圆形工具，将圆圈手动拉倒第一条带，并尽量将条带都圈起来。

9、点击菜单栏Analyze下拉出现的measurement，即可d出你选定区域的灰度统计值。也可以点击快捷键（英文状态下的键盘m）。

10、手动移动不规则圆圈至下一条条带，重复8、9步骤，直至所有条带都被测量。

11、当测定完所有条带，选结果中的“Edit”的“Select All”，然后复制数据“IntDen”到Excel表即可进行分析。也可以直接在Results对话框中，选择File → Saveas，直接导出excel表格。

12、在excel表格中将目的蛋白的灰度值除以内参蛋白的灰度值，进行归一化处理。

13、在GraphpadPrism软件中作柱状图。

在RGB模型中，如果R=G=B时，则彩色表示一种灰度颜色，其中R=G=B的值叫灰度值，因此，灰度图像每个像素只需一个字节存放灰度值（又称强度值、亮度值），灰度范围为0-255。一般有以下四种方法对彩色图像进行灰度化：

1.分量法

将彩色图像中的三分量的亮度作为三个灰度图像的灰度值，可根据应用需要选取一种灰度图像。

f1(i,j)=R(i,j)

f2(i,j)=G(i,j)

f3(i,j)=B(i,j)

其中fk(i,j)(k=1,2,3)为转换后的灰度图像在（i,j）处的灰度值。

2.最大值法

将彩色图像中的三分量亮度的最大值作为灰度图的灰度值。

f(i,j)=max(R(i,j),G(i,j),B(i,j))

3.平均值法

将彩色图像中的三分量亮度求平均得到一个灰度图。

f(i,j)=(R(i,j)+G(i,j)+B(i,j))

/3

4.加权平均法

根据重要性及其它指标，将三个分量以不同的权值进行加权平均。由于人眼对绿色的敏感最高，对蓝色敏感最低，因此，按下式对RGB三分量进行加权平均能得到较合理的灰度图像。

f(i,j)=0.30R(i,j)+0.59G(i,j)+0.11B(i,j))

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